Leica 生物顯微鏡——透射電鏡的使用

對于一名生物醫(yī)學(xué)工作者來說，徠卡生物顯微鏡是我們當(dāng)今進行理論及臨床研究中*的重要工具。為了充分發(fā)揮它的功效，必須學(xué)會正確使用。

使用徠卡生物顯微鏡除了掌握必要的電鏡基本知識以外，在工作中還應(yīng)注意下列環(huán)節(jié)。

1.保證透射電鏡各部分的對中。

徠卡生物顯微鏡所謂對中的標(biāo)準(zhǔn)就是要做到：（一）當(dāng)放大倍數(shù)改變時，視場的中心不會丟失，（二）當(dāng)改變物樣上的照明條件時，照明束不會失去均勻性或偏離中心；（三）對圖像進行調(diào)焦時，它不致偏離中心；（四）當(dāng)功能開關(guān)從一種模式轉(zhuǎn)換到另一種模式時，物樣上的照明情況不受影響。要保證以廣各點，首先電鏡本身的設(shè)計制造當(dāng)然府該是捐良的。其次對用戶來說，在每次使用前必須將儀器調(diào)整到*狀況。

徠卡生物顯微鏡電鏡的對中包括：*，電子槍、聚光鏡以及中間鏡、投影鏡等相對于物鏡的對中。因為一臺電鏡出廠·時已保證物鏡光軸與電鏡的機械軸*重臺，所以可把物鏡作為對中時的參考標(biāo)準(zhǔn)。第二*電鏡各級配備的電子束偏轉(zhuǎn)系統(tǒng)要對中合袖。第三，各級可動光闌（包括聚光鏡、物鏡、中間鏡的光闌）也要對中。誠然，般情況下各實驗室都有專門技術(shù)人員負(fù)責(zé)對電鏡的基本調(diào)整，以提供必要的工作條件。但是在使用過程中，有些對中情況不可避免地會遭到破壞或改變，因此研究人員必須能及時發(fā)現(xiàn)問題，并學(xué)會隨時加以調(diào)整。

2．特別重視各級透鏡尤其是物鏡的消像敬。

徠卡生物顯微鏡用低放大倍數(shù)檢查射到熒光屏的光斑時，如發(fā)現(xiàn)光斑偏離圓形。這說明存在聚光鏡的像散。在高放大倍數(shù)時它會導(dǎo)致zui大亮度的損失，并形成不對稱的照明孔徑角而影響成像質(zhì)量。因此在調(diào)對中的同時，應(yīng)該對聚光鏡消像散。

徠卡生物顯微鏡物鏡的消像散更為重要。由于像散的存在，不僅不能得到清晰的圖像，而且在高放大倍數(shù)的圖像中往往會出現(xiàn)一些細(xì)節(jié)假象。消像散的有效方法是在樣品支持膜上找到一個小孔，先將物鏡調(diào)于小量過焦?fàn)顟B(tài)，再調(diào)節(jié)消像散器使膜孔周圍出現(xiàn)的黑邊達到處處寬度均勻。zui后再將物鏡調(diào)回至正聚焦。從事高分辨工作的科技工作者必須自己學(xué)會消像散。

3．學(xué)會正確選擇各項工作參量和工作模式。

徠卡生物顯微鏡電鏡中有許多參量是可供選擇的，例如電子槍的加速電壓、聚光鏡決定的基本束班尺度、各級透鏡的可動光闌孔徑等。電鏡工作者可根據(jù)實驗樣品的厚度、化學(xué)組成、原始襯度特性以及耐幅照程度等自由選用上述各物理量。

徠卡生物顯微鏡電鏡本身還可用于不同工作模式，如常規(guī)成像、低倍查樣、選區(qū)成像、選區(qū)衍射及高分辨衍射等。如果加上x射線能譜儀、電子能量損失譜儀、婦描顯示單元等附件，則它的工作模式將更多。使用者可根據(jù)自己的工作目的和要求加以選用，可兼而用之，也可在工作的不同階段重點使用不同模式。當(dāng)代電鏡的重要待點就在于其多功能性，它集形態(tài)、結(jié)構(gòu)和成分等分橋廣一體。因此我們應(yīng)該密切注意科學(xué)技術(shù)發(fā)展的新趨勢，不斷拓寬自己的科技視野，充分利用當(dāng)代各項實驗方法。

4．認(rèn)真對待圖像記錄工作，力求能有高質(zhì)量的圖片到手。

徠卡生物顯微鏡可以說電鏡工作的成果幾乎全部體現(xiàn)在所獲得的圖片上。因此在保證電鏡*工作條件的前提下，電鏡工作者要十分重視圖像的拍攝，包括調(diào)焦、選擇放大倍數(shù)、調(diào)節(jié)襯度和曝光量等，還要防止照相過程中可熊遇到的機械振動和樣品漂移等。筆者認(rèn)為電鏡工作者應(yīng)該親自從事底片的沖擴，以保證獲得應(yīng)有的實驗成果。

5．鉆研制樣技術(shù)，提高樣品質(zhì)量。

徠卡生物顯微鏡制樣技術(shù)的優(yōu)劣是電鏡工作成敗的關(guān)鍵。每個電鏡工作者必須不遺余力地鉆研并掌握這門技術(shù)。有關(guān)電鏡樣品的制備，請查本書有關(guān)章節(jié)。

備注：Leica 生物顯微鏡——透射電鏡的使用部分新聞由http://www.cnnoptics.com/，編輯上傳。